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什么是T4 DNA 連接酶?

更新時間:2025-01-20      點擊次數:816

基因工程中用到的連接酶主要是大腸桿菌DNA連接酶以及T4 DNA連接酶,目前后者的應用更為廣泛。T4 DNA連接酶屬于DNA連接酶的一種。在載體構建和酶切連接的分子克隆中,可借助T4 DNA連接酶將插入片段連入載體中。T4 DNA連接酶催化雙鏈DNA中鄰近的3′-羥基-和5′-磷酸末端之間形成磷酸二酯鍵。雙鏈DNA中單鏈切口也被T4 DNA連接酶封閉。

T4 DNA 連接酶的功能特點:

連接類型:T4 DNA連接酶具有廣泛的底物特異性,它可以連接雙鏈DNA的粘性末端和平頭末端。此外,它還可以催化雙鏈RNA以及雙鏈RNA與DNA之間的連接,但不能催化單鏈核酸的連接。需要注意的是,雖然T4 DNA連接酶可以連接平末端,但連接效率相對較低。

應用廣泛:在基因工程中,T4 DNA連接酶被廣泛應用于DNA片段的連接、質粒的構建、基因克隆等實驗操作中。

T4 DNA連接酶的活性容易受到某些化學物質的抑制,如KCl和精胺等。因此,在進行連接反應時,需要避免這些抑制物質的存在。 
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